Le spectrophotomètre
d'absorption correspond à la quantité de lumière absorbée par une solution,
telle que mesurée par un instrument de laboratoire appelé un spectrophotomètre
d'absorption. Dans la chimie et de la biologie, des spectrophotomètres sont
utilisés pour une variété de fins. Ils peuvent aider à identifier des composés,
de déterminer les concentrations de solutions, ou d'estimer le nombre de
cellules en suspension dans un liquide. Spectrophotomètres travaillent en
dirigeant un ensemble filtré de certaines longueurs d'onde de la lumière à
travers une solution d'échantillon et sur une mesure de la lumière. La
quantité de lumière transmise ou absorbée par l'échantillon, ainsi que les
longueurs d'onde absorbée, révèle certaines des propriétés de l'échantillon.
La lumière que
l'être humain perçoit visuellement est une forme d'énergie, un rayonnement
électromagnétique, et comprend une gamme de longueurs d'onde sur une petite
partie du spectre électromagnétique. Les rayons gamma, les rayons X, et
d'autres longueurs d'ondes courtes de moins de 400 nanomètres (nm) ne sont pas
visibles à l'œil humain, et ni sont des longueurs d'onde plus longue que 700
nm, tel que l'infrarouge de lumière ou d'ondes radio. Les couleurs que les
humains perçoivent gamme de courtes vagues bleues et violettes autour de 400 nm
à travers l'arc en ciel de rouge, qui est plus proche de 700 nm.
Spectrophotomètres mesurent dans le visible avec un certain chevauchement dans
l'ultraviolet et sections infrarouge du spectre.
Annonce
Quand nous
voyons une couleur, par exemple une feuille verte, nous voyons les longueurs
d'ondes lumineuses qui sont transmises par cet article. Dans le cas de la
feuille verte, un composé dans les cellules de la plante, la chlorophylle
absorbe les longueurs d'onde bleues et rouges de la lumière blanche du soleil,
mais n'est pas absorber fortement le vert. Au lieu de cela, les longueurs
d'onde vertes et quasi-verts sont transmis, et la plante apparaît vert.
En tout état de
solution liquide donné, certaines longueurs d'onde de la lumière seront
absorbés en plus grande quantité que les autres. Spectrophotomètres diriger un
faisceau de lumière blanche à travers la solution de l'échantillon étudié.
L'absorbance du spectrophotomètre est la quantité de lumière qui est absorbée
par le composé à l'étude. Cette lumière est absorbée dans des quantités variant
dans une gamme de longueurs d'onde connues sous le spectre d'absorption .
Le spectre
d'absorption peut aider à identifier le composé échantillon. Par exemple,
certains pigments végétaux absorbent différentes longueurs d'onde de la
chlorophylle et peuvent être différenciés les uns des autres par leurs
parcelles d'absorption - graphiques où spectrophotomètre d'absorption est
affiché en fonction de la longueur d’onde. Les longueurs d'onde qui sont
absorbés dans le montant le plus élevé apparaissent comme des pointes sur le
graphique, donnant un graphique de chaque composé une forme caractéristique.
La concentration
de la solution peut également être déduite à partir de son absorbance du
spectrophotomètre. Ceci est fait par la loi de Lambert-Beer, également connu
sous la loi de Beer, qui est une équation de degré de spectrophotomètre
l'absorbance relative à la concentration au moyen de deux autres facteurs: le
coefficient d'extinction et la longueur du chemin, ou la largeur du tube
d'échantillon. Le coefficient d'extinction est un facteur chimique qui est
différente pour chaque composé, mais il peut être déterminé en testant un
échantillon de concentration connue dans le spectrophotomètre. La loi de Beer
peut ensuite être utilisé pour résoudre pour des concentrations inconnues d'un
même composé.