L'acide ribonucléique (ARN) de quantification est un moyen de détermination de la moyenne de la concentration de l'ARN dans une solution. Cette détermination peut être effectuée en utilisant une variété de procédures qui ne sont généralement divisées en deux catégories: spectrophotométrie ou fluorescent quantification du colorant. Spectrophotométrie repose sur la capacité de l'ARN d'absorber certaines longueurs d'onde de la lumière ultraviolette. Certains des colorants fluorescents, tels que le bromure d'éthidium, peuvent se lier à des acides nucléiques tels que l'ARN, et deviendront fluorescents quand ils se lient, ce qui permet la luminosité à mesurer.
Lorsque l'ARN est exposé à la lumière ultraviolette, il va absorber sélectivement cette lumière aux longueurs d'onde de 260 nanomètres (nm) et 280 nm. Ce procédé est effectué dans un spectrophotomètre, ce qui produit des longueurs d'onde de la lumière ultraviolette, et mesure la lumière qui passe à travers l'ARN. Des concentrations plus élevées d'ARN absorbent plus de lumière.
Une combinaison de ces deux longueurs d'onde est souvent utilisée dans la quantification de l'ARN puisque cette méthode permet aux chercheurs de savoir si un échantillon est contaminé par d'autres macromolécules telles que les protéines. Ces contaminants sont souvent absorber sélectivement la lumière de 280 nm, mais ne s'allume pas à 260 nm. Par conséquent, le calcul du rapport de la lumière absorbée à deux longueurs d'onde permet de déterminer le degré de contamination.
La quantification de l'ARN en utilisant des colorants fluorescents donne des résultats qui sont moins sensibles à certains contaminants, et peut être utilisé avec de faibles niveaux d'ARN qui rendrait impossible la spectrophotométrie. Colorants comme le bromure d'éthidium se lient à l'ARN, et la luminosité qui en résulte peut être mesurée directement à l'aide de photomètres à fluorescence. Si un photomètre n’est pas disponible, des solutions de concentrations connues d'ARN peuvent être préparées, et la luminosité de l'échantillon inconnu peut être plus ou moins par rapport à ceux-ci. La relation entre la luminosité et la concentration en ARN est linéaire, de sorte que les chercheurs peuvent déterminer rapidement une mesure de la concentration de la luminosité.
La quantification de l'ARN en utilisant soit la méthode peut être très sensible aux différents contaminants. Protéines, le phénol, et les grosses particules peuvent tous les résultats de la spectrophotométrie inexacte. Ces contaminants n'affectent pas fluorescent quantification de l'ARN du colorant, mais cette méthode peut être rendu impropre de la présence de l'acide désoxyribonucléique (ADN) dans un échantillon.
Les colorants qui lient les acides nucléiques se lient l'ADN et l'ARN, et présentent des luminosités similaires, assurant ainsi un échantillon propre de l'ARN est importante. La manière habituelle d'accomplir cela consiste à ajouter une enzyme qui détruit l'ADN, telles que la DNase, d'un échantillon mélangé avant d'ajouter un colorant. Selon la concentration de l'ARN dans un échantillon, et qui contaminants sont présents, les laboratoires peuvent utiliser l'une de ces méthodes pour quantifier l'ARN.
Lorsque l'ARN est exposé à la lumière ultraviolette, il va absorber sélectivement cette lumière aux longueurs d'onde de 260 nanomètres (nm) et 280 nm. Ce procédé est effectué dans un spectrophotomètre, ce qui produit des longueurs d'onde de la lumière ultraviolette, et mesure la lumière qui passe à travers l'ARN. Des concentrations plus élevées d'ARN absorbent plus de lumière.
Une combinaison de ces deux longueurs d'onde est souvent utilisée dans la quantification de l'ARN puisque cette méthode permet aux chercheurs de savoir si un échantillon est contaminé par d'autres macromolécules telles que les protéines. Ces contaminants sont souvent absorber sélectivement la lumière de 280 nm, mais ne s'allume pas à 260 nm. Par conséquent, le calcul du rapport de la lumière absorbée à deux longueurs d'onde permet de déterminer le degré de contamination.
La quantification de l'ARN en utilisant des colorants fluorescents donne des résultats qui sont moins sensibles à certains contaminants, et peut être utilisé avec de faibles niveaux d'ARN qui rendrait impossible la spectrophotométrie. Colorants comme le bromure d'éthidium se lient à l'ARN, et la luminosité qui en résulte peut être mesurée directement à l'aide de photomètres à fluorescence. Si un photomètre n’est pas disponible, des solutions de concentrations connues d'ARN peuvent être préparées, et la luminosité de l'échantillon inconnu peut être plus ou moins par rapport à ceux-ci. La relation entre la luminosité et la concentration en ARN est linéaire, de sorte que les chercheurs peuvent déterminer rapidement une mesure de la concentration de la luminosité.
La quantification de l'ARN en utilisant soit la méthode peut être très sensible aux différents contaminants. Protéines, le phénol, et les grosses particules peuvent tous les résultats de la spectrophotométrie inexacte. Ces contaminants n'affectent pas fluorescent quantification de l'ARN du colorant, mais cette méthode peut être rendu impropre de la présence de l'acide désoxyribonucléique (ADN) dans un échantillon.
Les colorants qui lient les acides nucléiques se lient l'ADN et l'ARN, et présentent des luminosités similaires, assurant ainsi un échantillon propre de l'ARN est importante. La manière habituelle d'accomplir cela consiste à ajouter une enzyme qui détruit l'ADN, telles que la DNase, d'un échantillon mélangé avant d'ajouter un colorant. Selon la concentration de l'ARN dans un échantillon, et qui contaminants sont présents, les laboratoires peuvent utiliser l'une de ces méthodes pour quantifier l'ARN.