La cytométrie en flux est l'étude des cellules uniques lors de leur passage à travers un flux liquide. Composants de la cellule, à l'intérieur ou sur la surface, doivent d'abord être marqués avec un ou plusieurs colorants fluorescents. Un laser à l'intérieur d'un instrument appelé un flux excite cytomètre ces molécules fluorescentes afin qu'ils émettent de la lumière à différentes longueurs d'onde. La quantité de fluorescence peut donner une indication de ce que le pourcentage de divers types cellulaires présents dans l'échantillon. La cytométrie de flux est utilisé dans les laboratoires pour une variété d'applications, y compris la recherche sur le cancer, de l'immunologie, et l'analyse du cycle cellulaire .
Pour effectuer cytométrie en flux, une suspension de cellules individuelles doit être badigeonnée avec des colorants fluorescents, qui peut être fait dans les deux en une seule étape ou en deux étapes. Les protéines cellulaires sont souvent colorées en utilisant des anticorps dirigés contre la protéine d'intérêt. Un procédé en une étape implique de coloration des cellules avec des anticorps qui sont déjà marquées avec un colorant fluorescent. Si des anticorps marqués ne sont pas disponibles, les cellules peuvent être colorées avec un premier non marqué anticorps primaire, puis avec un anticorps secondaire marqué par fluorescence.
Une fois que les cellules sont marquées, ils sont prêts pour l'analyse par cytométrie en flux. Un tube contenant la suspension de cellules est chargé sur le cytomètre de flux. Les cellules s'écoulent à travers l'instrument et passent devant un laser dans une seule file. Comme le laser frappe chaque cellule, la lumière est diffusée dans une direction vers l'avant ou sur le côté. Les mesures de diffusion vers l'avant donnent une indication de la taille des cellules, tandis que la diffusion latérale est une mesure de la granularité des cellules.
L'énergie du laser excite également les molécules de fluorochrome, le colorant fluorescent utilisé pour colorer les cellules. Un laser couramment utilisé pour la cytométrie de flux est le laser argon-ion qui émet de la lumière à une longueur d'onde de 488 nanomètres (nm). Cette lumière excite les molécules du colorant vert fluorescéine, qui émet alors une lumière à une longueur d'onde de 525 nm. Des tubes photomultiplicateurs (PMT) dans le flux ont cytomètre de filtres de lumière qui détectent la lumière émise par les différents fluorochromes. L'instrument peut avoir plusieurs PMT qui détectent la lumière à différentes longueurs d'onde.
Red-diode, une diode violette, ou He-Ne (hélium-néon) sont d'autres lasers qui peuvent être utilisés dans un cytomètre de flux. D'autres fluorochromes utilisés en cytométrie en flux analyse comprennent phycoérythrine, le rouge Texas, ou allophycocyanine. Différentes combinaisons de lasers et fluorochromes permettent au chercheur de collecter des informations sur de nombreux marqueurs cellulaires différents dans la même expérience.
Logiciel conçu pour une utilisation avec le flux facilite cytomètre le chercheur dans la visualisation des données. Les populations de cellules sont analysées en utilisant tracés de points, tracés de densité, ou d'histogrammes. Les régions peuvent être tirées autour des cellules d'intérêt et l'intensité de fluorescence peut donner une indication du pourcentage des différentes cellules dans l'échantillon.
