Le séquençage
d'ADN est une collection de méthodes scientifiques pour déterminer la séquence
de bases nucléotidiques d'une molécule d'ADN. Tous les organismes vivants
disposent de l'ADN (acide désoxyribonucléique) dans chacune de leurs cellules.
Chaque cellule dans un organisme contient le code génétique de l'organisme
entier. Le procédé de séquençage de l'ADN transforme l'ADN provenant d'un
organisme donné dans un format qui peut être utilisée par les chercheurs pour
l'étude de processus biologiques de base, la recherche médicale, et en médecine
légale.
Il existe
plusieurs procédés qui peuvent être utilisés dans le séquençage de l'ADN. Les
premiers procédés ont été développés dans les années 1970, et sont très
laborieux et prend du temps. La réaction la plus populaire et commune
séquençage utilisée aujourd'hui est séquençage didéoxynucléotides, qui peut
être fait à la main ou par des machines, en fonction de la quantité de matière
à être séquencé.
La quantité de
matériel génétique dans un organisme varie considérablement et est mesurée par
le nombre de bases de nucléotides qu'elle contient. Par exemple, un virus ou des
bactéries peuvent avoir aussi peu que cinq mille bases, tandis que l'humain
génome contient environ trois milliards de bases. La méthode de séquençage
didésoxynucléotidique de séquençage de l'ADN peut séquencer nombreux génomes en
jours, et de grands génomes au cours des années, plutôt que des décennies.
Il y a quatre
étapes dans le séquençage de l'ADN. Tout d'abord l'ADN doit être retiré de la
cellule. Ensuite, il subit une réaction de séquençage. Ensuite, l'ADN est
séparé par taille, et, enfin, analysés par un ordinateur qui place les
résultats dans un format utilisable.
La première
étape de séquençage de l'ADN est d'obtenir l'ADN de la cellule. Ceci peut être
réalisé mécaniquement ou chimiquement. ADN se décline en deux volets, mais un
seul brin peut être séquencé à la fois.
Une fois que
l'ADN est brisé, il est mis sur des vecteurs qui sont des cellules qui
s'auto-répliquer indéfiniment, avec une amorce, qui est un produit chimique qui
devient le processus a démarré. Cela crée des clones de l'ADN de l'organisme
qui est en cours de séquençage. La réaction de séquençage utilise l'amorce pour
démarrer le processus chimique de la reproduction du second brin d'ADN. Le
séquençage est réalisé dans un cycleur thermique de sorte que la réaction est
répétée de nombreuses fois. La répétition de la réaction conduit à un plus
grand rendement de l'ADN séquencée.
Après
séquençage, l'ADN est trié par taille par capillaire électrophorèse. L'ADN est
tiré par un courant électrique à travers un gel dans le capillaire, qui est un
tube en verre très mince. Les brins d'ADN apparaissent triés par longueur.
Comme ils s'échappent du capillaire, elles passent par un laser qui active des
colorants qui permettent d'identifier les bases nucléotidiques. Cette
information est introduite dans un ordinateur, qui affiche alors la séquence
d'ADN à l'écran.
